Diabetologia：激活但功能受损的清醒Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出有现家兔自身免疫催化到经常出有现1DF高血压诊疗征状的方面部将在儿童一时期就有很好的详细描述，多个家兔自身免疫催化无症状的儿童里有70%在血清转成后10周内患上高血压，而随访15年的儿童这一比例减小到84%。相相对之下，分之二诊疗1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的复发两组态还没有获取充分的全面性研究。

越来越多的人开始可用有系统系统来并不一定1DF高血压的方面：生殖在经常出有现多种家兔自身免疫催化时转至第1过渡期，经常出有现血糖异常时转至第2过渡期，经常出有现征状时转至第3过渡期。一些多发家兔自身免疫催化无症状的生殖，在1期和2期，方面慢，并发展为复发的1DF高血压。我们之前详细描述了一两组在首次检查到多种家兔自身免疫催化抽样后有数10年无高血压的较快方面者，这两组征状人数多于，但特性并不清楚。随后，我们发现家兔自身抗体特异性CD8+T细胞会催化当在方面加速的征状里基本不存在，但在近期复发和长期存在的高血压征状里很不易检查到。这可能确实，与方面征状相相对，这些征状自身免疫催化当的通气进一步提高。

早期全面性研究确实，尽管通气性T细胞会(Treg)数量经常性，但高血压征状存在一些功能性弱点，其里包括对IL-2的催化当灵来生性降低。此外，高血压征状里的effect当CD4+T细胞会可能对通气更具抵抗性，表现为effect当T细胞会的依赖性消退，自然转化成的Treg和游离转化成的可借Treg，以及抗体境况的CD4+T细胞会里IL-2催化当消退。本全面性研究的目的是详细描述了CD4+通气性T细胞会(Treg)在一小群极加速方面者里的特性，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX全面性研究是一项以人群系统化的纵向全面性研究，在21岁所列确诊的征状亲属里定期检查1DF高血压的危险因素。我们之前详细描述了长期加速方面者的特性，他们保持多重家兔自身免疫催化无症状最多于10年，但没有经常出有现高血压的诊疗征状，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名独自保持无高血压并想包括大量肝脏抽样的加速方面者纳入T和B细胞会功能性深入研究。在目前的全面性研究里，8名慢方面者(SP两组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的家兔自身免疫催化无症状。所有的大多数人都处于1DF高血压方面的1期，尽管一些人随后失掉了家兔自身免疫催化对某些抗体的无症状催化当，然而，一名征状已经处于2期有数6年，但没有经常出有现诊疗征状，一名征状被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集试验中抽样时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究里对该遗传物质顺利进行了单独审计。分立外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多值流式细胞会术和T细胞会依赖性试验审计遗传物质里Treg的振幅、表DF和功能性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、密切相关和回归)顺利进行无指导聚类深入研究，审计Treg表DF。

结果：与心理健康遗传物质相相对，来自慢方面体的清醒CD4+T细胞会的指导聚类推断，诱导的清醒CD4+ Treg振幅减小，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减小有关。一名HbA1c下降的征状与方面加速者和给定的对照两组相相对，Treg谱有所多种不同。功能性深入研究确实，与心理健康遗传物质相相对，来自加速方面体的Treg介导的CD4+effect当T细胞会依赖性相相对损坏。表现为对effect当CD4+T细胞会CD25和CD134隐含的依赖性减小。

所示1 全面性的表DF深入研究推断，CD4+Treg亚DF在慢方面链表里减小。由FlowSOM聚合的Treg室，有数在来自所有遗传物质的来生CD4+CD45RA -细胞会上。根据上标物隐含鉴定出有10个元簇:清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)可用9个多种不同Treg上标聚合的10个元簇的MST。每个路由推选一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在路由两组四周上色。每个路由里的饼所示说明单个上标的隐含高级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断整体上标隐含。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)聚合所示，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对数量级为每个metacluster罐该线所示(数量级> 0.05%)明确为HD和SP两组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞会(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞会(l)。白色橘色推选慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 可用CITRUS的预测模DF证实，Treg振幅的减小是方面加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)相对SP大多数人和给定的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞会上的不同。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的推选性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利进行分立，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(斑点)两组以及遗传物质SP 606(白色)里CD25+ cd127的振幅核心内容所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控同构的罐该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含准确度着色，标记突出有的簇被比对为SP和HD链表错综复杂的多种不同。(j)罐该线所示推断了在SP(斑点)和HD(灰点)两组里，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对数量级(比例)。(k)直方所示推断每个簇的表DF(粉色)和Treg上标相对隐含与背景隐含(白色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。背景与所有其他簇里上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验

所示3 与心理健康献血者相相对，方面加速者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T细胞会元簇(清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个隐含上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的隐含热所示(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)的FlowSOM GITR隐含串联，推断直方所示(c)和核心内容所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和验，p< 0.07(白色)所有遗传物质包括，p< 0.05(白色)遗传物质SP 606和给定的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)串联，推断直方所示(e)和核心内容所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验

所示4 来自加速方面的CD4+ treg细胞会依靠effect当CD4+T细胞会的灵来生性降低。SP两组用白色的该线和橘色说明，HD两组用黑色的该线和橘色说明，白色的该线/橘色说明遗传物质sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(应当答者)被上标为CFSE, Treg按判读的比例校准。用抗CD3 /28微珠来生化细胞会，人才3天内顺利进行流式细胞会术检查。(a-d)与CD4+应当答者相对应当的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者人才。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE依赖性总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性总和。可用无症状对照(诱导的响应当细胞会不含treg)计算依赖性总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

所示5 effect当CD4+T细胞会对加速方面的T细胞会来生化的依赖性更尖锐。SP两组用白色的该线和橘色说明，HD两组用黑色的该线和橘色说明，白色的该线/橘色说明遗传物质sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel上标，treg按判读的比例校准。用抗CD3 /28微珠来生化细胞会，人才3天内顺利进行流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者协同人才。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE依赖性调升(b)。(c,d) CD25依赖性调升(c)和CD134依赖性调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究生院里的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

论证：我们给出有的论证是，来自加速方面子的来生化清醒CD4+Treg在GITR隐含里获取了扩展和珍贵，强调了进一步全面性研究Treg在1DF高血压风险生殖里的异质性的必要。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28